簡述哺乳動物表達系統——HEK293細胞

隨著生物醫藥的飛速發展，哺乳動物細胞已被廣fan用于重組蛋白、疫苗、kangai試劑及其他臨床相關的藥物的生產中。      

現有的哺乳動物表達系統包括中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，嚙齒動物細胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細胞系（ＨEK293細胞, PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細胞和ＨEK293細胞占據重要地位。

本期主要簡述HEK293細胞的發展及蛋白表達系統的特點

1、HEK293細胞蛋白表達系統特點

（1）能在無血清的培養基中懸浮培養，穩定生長，大規模表達；

（2）轉染效率高；

（3）表達蛋白結構z  接近其在人體內構象；

（4）在培養體系中能夠快速增長，高密度培養。

2、HEK293細胞的發展

HEK293細胞來源于人類胚胎腎細胞中。在人的胚胎腎細胞中轉入人5型腺病毒DNA pian段，得到的人胚腎細胞永生化細胞系即為HEK293細胞。

293T細胞

HEK293細胞中轉入SV40T-antigen基因形成的高轉衍生株成為293T細胞。含SV40ori的質粒能夠在該細胞系中xianzhu擴增，從而促進表達載體的擴增，促進蛋白的表達，因此被廣泛應用于逆轉錄病毒生產、基因表達和蛋白表達。在293T細胞中gong轉染入pBND和pZAP質粒，獲得的具有G418耐受的細胞系即為293T/17細胞系。該細胞系具有高轉染性的特點。轉入EBV基因則形成293T/17 SF細胞系，該細胞系主要用于細胞的瞬時轉染及蛋白表達。

293H細胞

將HEK293細胞馴化后得到的能夠在無血清培養體系下快速生長、具有高轉染效率及高效蛋白表達性能的細胞系。該細胞系具有較好的貼附性，常用于噬菌斑檢測和蛋白的表達。例如293E細胞是在293-H細胞中插入EBNA-1基因的細胞系，該基因能夠穩定表達EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復制起點（oriP）的重組表達質粒，能夠在H293E細胞中復制，并實現蛋白的高效表達。而插入截短過后的EBNA-1基因得到293-6E細胞，該細胞能夠在無血清培養基中高表達生產蛋白及病毒載體。

293F細胞

能夠在無血清培養基中快速生長并高效表達蛋白的野生型293細胞系。在293F細胞中轉染pCMVSPORT6TAg.Neo 質粒的得到293FT細胞，該細胞穩定表達SV40大T抗原，并且促進z  適病毒產物的產生，可用于高滴度慢病毒載體的生產。當Flp-InTMT-RETM293細胞轉染了ecotropic receptor質粒和MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)報告質粒稱為293FTM細胞，主要用于蛋白互作的篩選。

293S細胞

被馴化成能夠懸浮培養且能夠耐受低鈣離子培養條件的293細胞系。在293S細胞轉染pcDNA6/TR質粒得到耐受bimadusu的細胞系即為293SG。該細胞系可用于四環素誘導的蛋白表達研究以及同源的N-糖基化蛋白的表達。293SGGD細胞則是在293SG轉染pcDNA3.1-zeo-STendoT質粒得到的細胞，其主要用于糖基化工程研究。

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